本发明涉及一种利用改进的en值判定检测结果准确度的方法，主要应用于最大可能数(mpn)法测定微生物指标结果准确性的评价。
背景技术：
因此，需要针对于上述的方法进行改进，寻找一种能有有效的评价mpn法测定粪大肠菌群结果准确性的方法。
技术实现要素：
为了解决上述的技术问题，本发明在en值的基础上，根据微生物检测结果多属于偏态分布的特性，提出了一种改进方法，并对8家实验室的粪大肠菌群(mpn法)考核结果进行了评价，且对评价“不满意”的实验室开展了问题追踪，并找到了产生问题的根源，进而证实了该评价方法在评价mpn法准确度的可行性。
本发明所提供的利用改进的en值判定检测结果准确度的方法，最大的创新是对于en值的计算采用了如下的两个公式来进行计算：
式(1)～(2)中，x为实验室的测量结果；
x为被测物品的参考值；
ux(l)为实验室测量值的左侧不确定度(一般包含因子k＝2，或95％置信区间)，即测量值与不确定度下限值之差；
ux(l)为被测物品的参考值的左侧不确定度(一般包含因子k＝2或95％置信区间)，即参考值与不确定度下限值之差；
ux(r)为实验室测量值的右侧不确定度(一般包含因子k＝2或95％置信区间)，即测量值与不确定度上限值之差；
ux(r)为被测物品的参考值的右侧不确定度(一般包含因子k＝2或95％置信区间)，即测量值与不确定度上限值之差；
当x＜x，测定值小于标准样品参考值，使用公式(1)计算，en＝en(l)；
当x≥x，测定值大于等于标准样品参考值，使用使用公式(2)计算，en＝en(r)。
上述的方法，包括以下的步骤：
(1)使用的定量标准菌株开展能力验证或能力考核，或开展日常质量控制；
(2)按照多管发酵法或酶底物法的国际、国家、行业和地方等标准方法，开展检测，结果报mpn值，并给出置信区间；
(3)按照权利要求1中en值的计算及评价方法开展准确度评价。
本次能力考核，包括以下的步骤：
s1：考核菌株：定量标准菌株：大肠杆菌escherichiacolinctc12241，标准值为31.1±5.2cfu，包含因子k＝2；
s2：稀释考核样品：将样品用100ml的生理盐水溶解，充分震荡混匀后立即使用；
s3：按照多管发酵法开展检测，使用多管发酵方式：平均分为10ml、1ml和0.1ml接种水样，结果报100ml水样中的粪大肠菌群数最大可能数；
s4：结果评价：采用以上步en值计算公式(1)、式(2)来计算；当|en|≤1，结果评价“满意”；当|en|＞1，结果评价“不满意”。
生理盐水的质量浓度为0.9％，且其为无菌生理盐水。
s3中多管发酵方式为9管发酵方式、12管发酵方式、15管等发酵方式，不限于以上数量管数的发酵方式。
优选的，s3中多管发酵方式为15管发酵方式：5份10ml、5份1ml和5份0.1ml接种水样，结果报100ml水样中的粪大肠菌群数最大可能数。
上述的方法在定量标准菌株不确定度为非对称分布情况中的应用，也是本发明所要保护的范围。
本发明的有益效果在于：
(1)在现有的en值计算方法的基础上，本发明通过改进en值，考虑了定量标准菌株和mpn值的不确定度分布特点，将其分成两种情况考虑，即选择性使用en(l)和en(r)值进行评价，使得en值评价方法能应用于微生物监测领域；
(2)改进的en值不仅可以评价mpn法的能力验证/能力考核结果，而且还可以用于日常质控样品的准确度评价，符合生态环境监测质量管理和质量控制科学化和精细化的要求；
(3)本发明的方法还适用于定量标准菌株不确定度为非对称分布的情况。
具体实施方式
为了能使本领域技术人员更好的理解本发明，现结合具体实施方式对本发明进行更进一步的阐述。
实施例1
mpn法测定粪大肠菌群结果准确性的评价方法，包括以下的步骤：
1.1考核菌株
定量标准菌株：大肠杆菌(escherichiacoli)nctc12241(bioballsingleshot，lotnumber:b2976,btf-abiomerieuxcompanysydneyaustralia),标准值为31.1±5.2cfu(包含因子k＝2)。
1.2考核样品稀释方法
临用前小心打开小瓶，将样品用100ml的无菌生理盐水(0.9％)溶解，充分震荡混匀后立即使用。
1.3检测方法
按照多管发酵法[hj347.2-2018水质粪大肠菌群的测定多管发酵法[s].hj347.2-2018waterquality—determinationoffecalcoliform—manifoldzymotechnics[s]]开展检测，使用15管发酵方式，即5份10ml、5份1ml和5份0.1ml接种水样，结果报100ml水样中的粪大肠菌群数最大可能数。
实施例2
2结果评价
2.1改进之前的en值
式(3)中，x是实验室的测量结果；x是被测物品的参考值；ux是参加者结果的扩展不确定度(包含因子k＝2)；ux是指定值的扩展不确定度(包含因子k＝2)。式(4)是合成不确定度计算公式，uc为合成不确定度，u1、u2等为不确定度分量，该公式适用于不确定度对称分布形式。
改进后的en值
实质上，公式(4)中，uc包含2个值uc(l)和uc(r)，其中，uc(l)为左侧不确定度，即测量值与下限值之差，它是不确定度分量u1(l)u2(l)等合成的；uc(r)为右侧不确定度，即测量值与上限值之差，它是不确定度分量u1(r)u2(r)等合成的。不确定度对称分布时，uc(l)和uc(r)相等，则uc＝uc(l)＝uc(r)。然而，mpn值的不确定度具有不对称性，则合成不确定度时，ux有2个值ux(l)和ux(r)，其中，ux(l)为左侧不确定度，即mpn值与下限值之差；ux(r)为右侧不确定度，即mpn值与上限值之差。因此，推荐计算出2个en值。
公式(1)(2)中ux＝ux(l)＝ux(r)，按照公式计算出en(l)和en(r)，因为类似拖尾峰的非对称分布，一般en(l)＞en(r)。
当x＜x，测定值小于标准样品参考值，使用公式(1)计算，en＝en(l)；当x≥x，测定值大于等于标准样品参考值，使用使用公式(2)计算，en＝en(r)；然后再按照2.2进行en值评价。
2.2评价方法
当|en|≤1，结果评价“满意”；当|en|＞1，结果评价“不满意”。
实施例3
3.1考核结果：
8家实验室的检测结果及扩展不确定，见表1。
表1检测结果及置信区间
3.2改进的en值评价结果
按照改进的en值评价考核结果，6家实验室结果评价“满意”，2家实验室(7、8号实验室)结果“不满意”，详见表2。
表2结果评价
对“不满意”的7、8号实验室开展问题追踪，查阅原始记录和结果报告单，发现初发酵时为阳性的试管，进行复发酵时，有几支阳性试管变为阴性。这种情况属于异常，因为本次考核用菌株为大肠杆菌，该菌株在初发酵培养基和复发酵培养基中都能很好的生长，不应该出现阳转阴的情况。与实验室操作人员沟通，最终确定为过失误差，即复发酵接种时，接种环经酒精灯灼烧后，未充分冷却，导致接菌环上的待接菌烫死，未成活，故复发酵变成阴性。如果排除过失误差，按照与初发酵相同的阳性试管，得到mpn值为49，则评价结果也为“满意”。问题追踪结论进一步验证了改进的en值评价的可行性。
因此，本发明的方法具有以下的特点：
改进的en值考虑了定量标准菌株和mpn值的不确定度分布特点，选择性使用en(l)和en(r)值进行评价，评价结果仍为“满意”和“不满意”2种情况，当“满意”时，无需采取进一步措施；当“不满意”时，产生措施信号。同理，本发明的方法也适用于定量标准菌株不确定度为非对称分布的情况。
本发明创造性的将en值评价方法应用于微生物监测领域，尚未见文献报道。但是由于直接将en值评价方法应用于微生物监测领域会导致en值无法使用无法取值；因此，本发明人通过对上述的en值评价方法进行改进，使其能应用于微生物监测领域，并且取得了良好的效果，该方法具有科学性和合理性，本发明通过问题追踪验证了改进的en值评价的可行性，从而证实了本发明方法的可行性。
随着生态环境监测工作的不断深入，对监测数据质量的要求不断提高，标准菌株的配备、培养基技术验收和定量菌株使用等质量控制措施将不断完善，改进的en值不仅可以评价mpn法的能力验证/能力考核结果，而且还可以用于日常质控样品的准确度评价，符合生态环境监测质量管理和质量控制科学化和精细化的要求。
mpn法的测量结果与化学分析法相比具有较宽的置信区间或不确定度，可以通过增加夺冠发酵法的测定管数[参考1.3中的文献](24管或30管)以及增加酶底物法的定量孔缩小其置信区间或降低其不确定度，以满足分析精度要求。