目前，CAR-T细胞是最成功的免疫细胞治疗种类。但是传统CAR-T仍然存在一些局限性，导致各研究机构/企业对CAR-T疗法进行优化，试图破局。在不断的发展和进步中，越来越多的CAR-T治疗策略被提出，“现货”CAR-T、“安全开关”CAR-T、双靶点CAR-T......纷纷涌现，造成目前CAR-T研究百花齐放的局面。
近年来，“体内构建”/“体内重编程”的invivoCAR-T成为一个新的CAR-T研究方向和热点，也涌现出了几条不同的技术路线分支，今天我们就来看一下这些体内CAR-T的不同之处。
CAR-T细胞治疗通常是在体外生产CAR-T，首先获取初始细胞，然后经过一系列的纯化、激活、转染、扩增、冻存、运输等流程，再将CAR-T细胞成品输入患者体内进行治疗。
但是“体内”CAR-T的提出，则是与传统的CAR-T大相庭径。首先，给患者输注的就不是CAR-T细胞成品，而是一个“引导物”，使得人体内的T细胞自己转变成CAR-T。
也就是说，“体内”CAR-T有望成为一种真正的通用型CAR-T治疗方法。
mRNA技术体内重编程CAR-T
利用病毒构建体体内转导CAR-T
这个技术路线其实还是比较清晰的。因为我们知道传统的体外生产的CAR-T，大多数是利用慢病毒/逆转录病毒进行转染T细胞而成的。而该路线，大致上来说，是将体外转染这一步放在了体内。这边提一个代表公司和技术——UmojaBiopharma的VivoVecCAR-T。Umoja开发了一种专有的VivoVec体内递送技术，可以携带CAR的慢病毒直接给患者输注，然后再利用RACR（RapamycinAcivatedCytokineReceptor，雷帕霉素激活细胞因子受体）技术实现CAR-T细胞的快速制备和控制。
Sana公司的Fusogen技术invivoCAR-T
FusogenTechnology——通过利用携带目标基因和Fusogen（一种天然蛋白质，能够介导人体内细胞间和细胞内融合事件）的Fusosome，靶向目标细胞，然后将载体融合进目标细胞中，进行基因组整合，进行体内细胞的重编程。
Sana使用的是来自副粘病毒科病毒的Fusogen，这个Fusogen蛋白复合体由受体识别G蛋白和膜融合F蛋白组成，Sana还可以通过对G蛋白进行改造而获得高度选择性的Fusogen，如添加scFvs、VHHs或DARPins，使得能够靶向不同的细胞类型（包括T细胞、肝细胞或造血干细胞）。
延伸阅读：120万的一针的CAR-T实现体内一天生产，期待成本下降！
首先通过从患者身上分离出T细胞，并将未激活的T细胞与装载CAR的病毒载体进行混合。再将这种混合物倒在MASTER上，随后将MASTER注入小鼠体内。支架有激活T细胞的抗体，可以快速激活T细胞；此外，MASTER材料还含有IL-2，MASTER植入体内后，IL-2开始渗出，促进CAR-T细胞的快速增殖。科学家们还在淋巴瘤小鼠模型中进行了试验。一组接受了MASTERCAR-T，第二组接受了常规静脉注射的CAR-T细胞治疗，对照组接受非工程化T细胞。研究发现，接受MASTER技术生产的CAR-T细胞表现出更好的治疗效果。但是这种方法在实际进入临床前还有更多的工作要进行，首先需要在多种动物模型中验证MASTER技术的安全性和有效性。此外，主植入物需要通过手术植入体内，手术伤口也需要评估。
总结
但值得注意的是，对比CAR-T来说，体内构建CAR-T安全性的问题可能会更具有挑战性。尤其是直接利用病毒构建体的技术路线来说，毕竟利用病毒的基因治疗也因为病毒载体的特殊性而导致几次受挫。
同时，也需要考虑其他问题，例如免疫细胞数量问题。对于癌症患者来说，当患者未来入组时，此前已经接受了多线治疗，体内免疫细胞的数量和质量已经很差，能否对于病毒构建体或者其他“引导物”产生响应，以产生足够的CAR免疫细胞进行肿瘤杀伤。
此外，靶向性问题、递送效率问题、毒性问题都是需要考虑的。
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