深扒一下病毒库DNA检测技术

当人体感染HIV病毒的时候,病毒首先以RNA病毒颗粒通过利用EnV吸附在cd4细胞膜的CXCR4或CCR5结合位点上,然后于细胞膜进行融合,向细胞内注入HIVRNA,RNA是病毒的遗传物质,完成了第一步入侵。

在细胞内的HIVRNA利用逆转录酶的作用下,逆转录出双链DNA。逆转录好的病毒DNA像一个狡猾的间谍,不仅能够进入宿主的核心机构——细胞核,还能在整合酶的作用下,把自己整合到宿主细胞的DNA当中,堂而皇之地成为宿主细胞的一部分,潜伏在细胞和组织器官中,就形成了病毒库。

并不能,目前国际公认的携带病毒的细胞有CD4细胞、树突状细胞、巨噬细胞等,CD4细胞是目前研究的HIV主要易感细胞,巨噬细胞是在包括肝,肺,骨髓和脑在内的全身组织中发现的大白细胞,目前的检测只能检测全血里面的HIVDNA的含量,包括国内的病载RNA检测也都是一样的原理,并不能检测到组织器官里面的病毒DNA含量。

检测病毒库主要通过PCR-荧光探针法来检测DNA,荧光定量PCR特异性检测方法是在PCR反应中利用标记荧光染料的基因特异寡核苷酸探针来检测产物;而非特异性检测方法是在在PCR反应体系中,加入过量荧光染料,荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射出荧光信号。前者由于增加了探针的识别步骤,特异性更高。

国内外,做HIV检测企业已获批30家,其中HIV核酸检测企业共9家(国内4家,国外5家)。RNA定性检测企业:达安基因、丽珠、东北制药、宝瑞源;

RNA定量检测企业:罗氏、雅培、梅里埃、凯杰、北京万泰、达安基因;

DNA定性检测企业:罗氏、雅培;

DNA定量检测企业:海力特

1、HIV-1DNA检测用于早期筛查(可结合干血斑),检测干血斑中的HIV-1DNA,有较高的特异性(495/496)、敏感性(301/304)和稳定性(801/802)。

2、HIV-1DNA检测用于药物疗效和疾病复发监测,经48周的ART治疗后,HIV-1DNA水平有明显降低(p<0.0001)。当终止药物治疗12周检测时,HIV-1DNA显著性增加(p<0.0001)。定量检测可以准确的评估血液中反馈出的身体病毒库状况。

4、HIV-1DNA病毒库检测,探索功能性治愈,HIV无法根治的主要原因在于病毒库储存库的存在。经过ART长期(2.5年)和短期(30天)治疗的HIV患者,HIV-1DNA、2-LTRDNA、UnsplicedmRNA、MultiplysplicedmRNA载量降低,预示着可以作为探索HIV功能性治愈的指标。

核酸DNA检测试剂盒特点

HIV-1DNA检测试剂盒用HIV特异性引物和HIV特异性探针(Taqman探针),配以PCR反应液、耐热DNA聚合酶(Taq酶)、核苷酸单体(dNTPs)等成分,用PCR体外扩增法定量检测HIV-1DNA。试剂盒设置了内标,用于控制假阴性,同时设置了dUTP/UDG反应体系,PCR扩增时37℃预处理,利用UDG酶将可能存在的PCR产物污染充分降解,排除假阳性结果。HIV-1DNA检测试剂盒具有极高的敏感性和特异性,能检测M群所有亚型和N、O、P群中大部分亚型。并且灵敏度高,成本低,有利于HIV-1筛查和早期诊断的普及推广。此外,在艾滋病疾病疗效评估方面,本公司HIV-1DNA检测试剂盒相比HIVRNA监测,具有更长久的病毒学应答反应,可替代HIVRNA检测,具有明显的临床优势。在探索功能性治愈方面,探索停药标准及病毒反弹预测方面,目前市场上无可替代产品。

核酸DNA优于核酸RNA

从理论上来说,DNA是最早被感染的;因为源病毒必须通过吸附、穿入,进入宿主细胞,再环化、整合入宿主细胞染色体DNA,然后转录翻译、成熟出芽成为病毒颗粒,才具有传播性,因此DNA不但早于RNA的感染,更远远早于人体因此应激产生的抗体。

因此,在RNA还没有大量产生,或已经被药物清除,无法检测时,DNA仍是可以检测出来的。并且,DNA比较稳定,可以采用干血斑检测,而RNA易于降减,采用干血斑的准确性会大大降低。

HIV-1DNA检测的意义

核酸检测方面,由于病毒标志物出现更早,在窗口期前移上具有抗体检测技术不可比拟的优势。目前多直接检测外周血RNA(病毒载量),广泛用于辅助诊断(我国规定HIV感染者每年至少做1次,AIDS病人2次),但由于对设备、人员的要求较高,同时价格昂贵,小量检测成本甚至可高达1400余元/反应(罗氏技术),要推广应用于男同等高危人群的早期筛检等,难度很大。HIVDNA检测及总核酸检测在成本控制、稳定性等方面有更大的潜力,尤其在婴幼儿早期诊断上(干扰因素少,特异性高)优于RNA检测。

HIV-DNA检测技术

1.高灵敏度

最低检出限:50copies/106cells

线性范围:50~1×106copies/106cells

2.科学的定量和内控系统

科学的定量及试剂盒内控:本试剂盒可实现双重定量,即在一个反应中可同时对HIV-1DNA和细胞数进行准确定量,最后中可得到标准的可客观反映百万细胞中HIV-1DNA含量检测值。同时,细胞定量可作为试剂盒内控,可有效控制假阴性。

3.高特异性

血红蛋白(<2g/dL),总胆红素(<28mg/dL)、甘油三酯(<3000mg/dL)、总IgG(<40g/L)以及EDTA终浓度为(<300mg/dL)对检测结果没有影响。对乙肝病毒、丙肝病毒、梅毒、巨细胞病毒、腺病毒、单纯疱疹病毒及EB病毒无交叉反应。

4.精密度

批内、批间重复性好,检测精密度标准品浓度对数值的变异系数CV<5%

海力特子公司海善时可以提供检测服务,HIV微量精准检测试剂盒,全球首家HIVDNA定量检测试剂,为HIV核酸检测提供完整、先进解决方案!

从早期感染的初筛,在感染7天就可以准确检测出病毒库,可以帮你快速的确诊,便于急性期上药。干血斑技术可以安全快速解决检测需求,不管你是否在偏远山区,都可以利用快递进行干血斑检测。

诊断评估自己的病毒库规模,血液中的病毒库在感染后一直占有很大的比重,约占有身体已知病毒库的90%,了解病毒库的规模,便于有针对性的治疗。

治疗后监测,就像国内现在进行的病载检测一样,检测病毒库DNA技术则显示更加精细重要,病毒DNA库会优先于病毒RNA出现反弹提示,国内知名医院已经在对病毒库控制较好的人群进行停药研究。

越来越多的研究消息指向清除病毒库DNA,检测自己的病毒库,了解自己的病情控制状况,预防机会性感染和发病的发生,检测并掌握自己的病毒库规模显得尤为重要。

有一件令人值得高兴的事情,为了能了解更加清楚病毒库检测技术,我尝试联系了广州的这家公司海善时,海善时的工作人员详细的跟我讲了一下他们的检测技术,和国内医院疾控和合作检测的事情,相信不久的将来,大家都可以像检测病载一样简单,通过身边的医院进行检测HIV病毒库DNA。为了能让更多加了解他们的技术,本月底他们将会举办线上交流会,到时候我会转发交流会的链接,线上观看交流会,并写下交流总结的朋友,都会获得惊喜。记得告诉工作人员,你们是从HIV最新动态上看到的信息哟!

然后……

不管你是做

还是做

最后说一下,有必要检测吗?

如果你想快速确诊感染没有,心里踏实!有必要!

如果你吃药3年以上,检测病毒库的规模对于预测疾病发生很有必要!

THE END
1.试纸胶体金法检测艾滋病准确度高吗有问必答你发生高危性接触窗口期之后。使用胶体金法做的HIV的抗体筛查检测结果阴性,可以排除感染了,准确率是没https://www.120ask.com/question/71779319.htm
2.HIV检测试准确度高吗专家文章HIV检测试准确度高吗 HIV测试纸一般指人类免疫缺陷病毒测试纸,这一工具的准确度一般较高,但具体的感染情况应以医学检查的结果为主。 如果感染了人类免疫缺陷病毒,患者的体内会逐渐出现相关的病毒抗体,而这一抗体可以在人体的血液、唾液、尿液中检测出。人类免疫缺陷病毒测试纸主要是采集患者的尿液样本进行测试,如果https://www.bohe.cn/article/view/rl3rpcsjkorf0nw.html
3.化学发光法准确度高吗(化学发光法是什么原理)因此,开展乙丙检测和八项传染病筛检,对预防患者院内交叉感染、避免医疗纠纷、减少高致病性病原微生物导致医护人员职业暴露等方面具有重要意义。 乙丙肝系列和八项传染病筛检一直采用的方法为酶联免疫吸附法(ELISA),为手工操作,误差较大,使结果准确性降低。全自动化学发光免疫法具有灵敏度、准确性均高于酶免方法的优点,http://www.leptech.cn/show/xxy/3192/
4.关于hiv医院检查准确度高吗有问必答问题分析:检测率基本上可以达到百分之百的,但是在临床上,也有假阳性的发生,因为艾滋病毒感染人体之后https://mip.club.xywy.com/wenda/195908844.htm
5.患者想了解HIV检测情况,医生详细解答了HIV窗口期和不同检测方式的建议:患者需关注HIV窗口期,并在合适的时间节点进行准确的检测。初筛试纸和静脉抽血都是有效的检测方法,但静脉抽血更为准确。医生应提醒患者注意时间节点的重要性并耐心等待检测结果。如有疑虑或症状出现,及时就医咨询专业医生。药物治疗需遵循医嘱,同时保持良好的生活习惯有助于预防病毒感染。 本站内容仅供医学知识科普https://cont.jd.com/qa/220126109082274
6.2005年第14期《院报》内容(总第40期)北京协和医院为响应北京市政府和医院领导号召,充分节约每一度电、每一滴水,行政处倡议全院同志:作为协和的每名员工都要从自己作起,要以身作则,带头节水节电,切实将节水、节电融入到日常工作中。不大开水龙头,尽可能采用自然光,做到人走灯灭、人走空调关;合理设置空调温度,将夏季空调温度调高1-2摄氏度,开空调时注意将门窗https://ims.pumch.cn/detail/15745.html
7.CMDE人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV1)DNA检测试剂盒(PCR本产品分析性能研究主要包括检出限与定量限、线性范围、准确度、精密度、特异性(交叉反应、干扰物质)和核酸提取相关性能研究。 1.检出限与定量限 申请人以梯度稀释的HIV-1DNA单拷贝整合细胞为样本,采用三批试剂对系列浓度样本进行检测,确定该产品检出限为50copies/106cells,定量限为100copies/106cells。采用HIV-1不http://www.sigma-stat.com/index.php?m=home&c=View&a=index&aid=3160