当人体感染HIV病毒的时候,病毒首先以RNA病毒颗粒通过利用EnV吸附在cd4细胞膜的CXCR4或CCR5结合位点上,然后于细胞膜进行融合,向细胞内注入HIVRNA,RNA是病毒的遗传物质,完成了第一步入侵。
在细胞内的HIVRNA利用逆转录酶的作用下,逆转录出双链DNA。逆转录好的病毒DNA像一个狡猾的间谍,不仅能够进入宿主的核心机构——细胞核,还能在整合酶的作用下,把自己整合到宿主细胞的DNA当中,堂而皇之地成为宿主细胞的一部分,潜伏在细胞和组织器官中,就形成了病毒库。
并不能,目前国际公认的携带病毒的细胞有CD4细胞、树突状细胞、巨噬细胞等,CD4细胞是目前研究的HIV主要易感细胞,巨噬细胞是在包括肝,肺,骨髓和脑在内的全身组织中发现的大白细胞,目前的检测只能检测全血里面的HIVDNA的含量,包括国内的病载RNA检测也都是一样的原理,并不能检测到组织器官里面的病毒DNA含量。
检测病毒库主要通过PCR-荧光探针法来检测DNA,荧光定量PCR特异性检测方法是在PCR反应中利用标记荧光染料的基因特异寡核苷酸探针来检测产物;而非特异性检测方法是在在PCR反应体系中,加入过量荧光染料,荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射出荧光信号。前者由于增加了探针的识别步骤,特异性更高。
国内外,做HIV检测企业已获批30家,其中HIV核酸检测企业共9家(国内4家,国外5家)。RNA定性检测企业:达安基因、丽珠、东北制药、宝瑞源;
RNA定量检测企业:罗氏、雅培、梅里埃、凯杰、北京万泰、达安基因;
DNA定性检测企业:罗氏、雅培;
DNA定量检测企业:海力特
1、HIV-1DNA检测用于早期筛查(可结合干血斑),检测干血斑中的HIV-1DNA,有较高的特异性(495/496)、敏感性(301/304)和稳定性(801/802)。
2、HIV-1DNA检测用于药物疗效和疾病复发监测,经48周的ART治疗后,HIV-1DNA水平有明显降低(p<0.0001)。当终止药物治疗12周检测时,HIV-1DNA显著性增加(p<0.0001)。定量检测可以准确的评估血液中反馈出的身体病毒库状况。
4、HIV-1DNA病毒库检测,探索功能性治愈,HIV无法根治的主要原因在于病毒库储存库的存在。经过ART长期(2.5年)和短期(30天)治疗的HIV患者,HIV-1DNA、2-LTRDNA、UnsplicedmRNA、MultiplysplicedmRNA载量降低,预示着可以作为探索HIV功能性治愈的指标。
核酸DNA检测试剂盒特点
HIV-1DNA检测试剂盒用HIV特异性引物和HIV特异性探针(Taqman探针),配以PCR反应液、耐热DNA聚合酶(Taq酶)、核苷酸单体(dNTPs)等成分,用PCR体外扩增法定量检测HIV-1DNA。试剂盒设置了内标,用于控制假阴性,同时设置了dUTP/UDG反应体系,PCR扩增时37℃预处理,利用UDG酶将可能存在的PCR产物污染充分降解,排除假阳性结果。HIV-1DNA检测试剂盒具有极高的敏感性和特异性,能检测M群所有亚型和N、O、P群中大部分亚型。并且灵敏度高,成本低,有利于HIV-1筛查和早期诊断的普及推广。此外,在艾滋病疾病疗效评估方面,本公司HIV-1DNA检测试剂盒相比HIVRNA监测,具有更长久的病毒学应答反应,可替代HIVRNA检测,具有明显的临床优势。在探索功能性治愈方面,探索停药标准及病毒反弹预测方面,目前市场上无可替代产品。
核酸DNA优于核酸RNA
从理论上来说,DNA是最早被感染的;因为源病毒必须通过吸附、穿入,进入宿主细胞,再环化、整合入宿主细胞染色体DNA,然后转录翻译、成熟出芽成为病毒颗粒,才具有传播性,因此DNA不但早于RNA的感染,更远远早于人体因此应激产生的抗体。
因此,在RNA还没有大量产生,或已经被药物清除,无法检测时,DNA仍是可以检测出来的。并且,DNA比较稳定,可以采用干血斑检测,而RNA易于降减,采用干血斑的准确性会大大降低。
HIV-1DNA检测的意义
核酸检测方面,由于病毒标志物出现更早,在窗口期前移上具有抗体检测技术不可比拟的优势。目前多直接检测外周血RNA(病毒载量),广泛用于辅助诊断(我国规定HIV感染者每年至少做1次,AIDS病人2次),但由于对设备、人员的要求较高,同时价格昂贵,小量检测成本甚至可高达1400余元/反应(罗氏技术),要推广应用于男同等高危人群的早期筛检等,难度很大。HIVDNA检测及总核酸检测在成本控制、稳定性等方面有更大的潜力,尤其在婴幼儿早期诊断上(干扰因素少,特异性高)优于RNA检测。
HIV-DNA检测技术
1.高灵敏度
最低检出限:50copies/106cells
线性范围:50~1×106copies/106cells
2.科学的定量和内控系统
科学的定量及试剂盒内控:本试剂盒可实现双重定量,即在一个反应中可同时对HIV-1DNA和细胞数进行准确定量,最后中可得到标准的可客观反映百万细胞中HIV-1DNA含量检测值。同时,细胞定量可作为试剂盒内控,可有效控制假阴性。
3.高特异性
血红蛋白(<2g/dL),总胆红素(<28mg/dL)、甘油三酯(<3000mg/dL)、总IgG(<40g/L)以及EDTA终浓度为(<300mg/dL)对检测结果没有影响。对乙肝病毒、丙肝病毒、梅毒、巨细胞病毒、腺病毒、单纯疱疹病毒及EB病毒无交叉反应。
4.精密度
批内、批间重复性好,检测精密度标准品浓度对数值的变异系数CV<5%
海力特子公司海善时可以提供检测服务,HIV微量精准检测试剂盒,全球首家HIVDNA定量检测试剂,为HIV核酸检测提供完整、先进解决方案!
从早期感染的初筛,在感染7天就可以准确检测出病毒库,可以帮你快速的确诊,便于急性期上药。干血斑技术可以安全快速解决检测需求,不管你是否在偏远山区,都可以利用快递进行干血斑检测。
诊断评估自己的病毒库规模,血液中的病毒库在感染后一直占有很大的比重,约占有身体已知病毒库的90%,了解病毒库的规模,便于有针对性的治疗。
治疗后监测,就像国内现在进行的病载检测一样,检测病毒库DNA技术则显示更加精细重要,病毒DNA库会优先于病毒RNA出现反弹提示,国内知名医院已经在对病毒库控制较好的人群进行停药研究。
越来越多的研究消息指向清除病毒库DNA,检测自己的病毒库,了解自己的病情控制状况,预防机会性感染和发病的发生,检测并掌握自己的病毒库规模显得尤为重要。
有一件令人值得高兴的事情,为了能了解更加清楚病毒库检测技术,我尝试联系了广州的这家公司海善时,海善时的工作人员详细的跟我讲了一下他们的检测技术,和国内医院疾控和合作检测的事情,相信不久的将来,大家都可以像检测病载一样简单,通过身边的医院进行检测HIV病毒库DNA。为了能让更多加了解他们的技术,本月底他们将会举办线上交流会,到时候我会转发交流会的链接,线上观看交流会,并写下交流总结的朋友,都会获得惊喜。记得告诉工作人员,你们是从HIV最新动态上看到的信息哟!
然后……
不管你是做
还是做
最后说一下,有必要检测吗?
如果你想快速确诊感染没有,心里踏实!有必要!
如果你吃药3年以上,检测病毒库的规模对于预测疾病发生很有必要!