非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测方法&东胜龙eQ162C荧光定量(qPCR)仪实验数据东胜龙

前言

非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测方法

eQ162C便携式荧光定量PCR检测系统

极简·易用

eQ162C

技术参数

通量及耗材

16*0.2ml，0.2ml8联管*，单管

（对管盖无透明要求，管盖可用mark笔标记）

反应体系

5-100μl

动力学范围

1-1010Copies

检测灵敏度

1Copy

荧光检测通道

通道1：FAM通道2：HEX/JOE（特殊波长可定制）

变异系数

CV≤3%

≥0.98

检测传感器

高灵敏度PMT

模块温度设置范围

10-99.9℃

热盖温度设置范围

30-105℃、自动热盖

控温技术

半导体制冷器、Tube模拟试管智能控温

最大升降温速率

≥4℃/s

平均升降温速率

2.5℃/s

模块控温精度

≤0.1℃

温度准确度

≤0.2℃

模块温度均匀性

≤±0.2℃（@55℃）

指示灯

电源、热盖开盖、运行中、通讯、UV处理中、故障

DNA有限降解

可选内置UV紫外光源（注：有限降解处理不能替代灭菌处理）

信号接口

RS232C（用户自配计算机）

输入电源

100-240VAC300VA

分析软件

eQ162CV1.0及以上运行环境windows7/10

软件功能

系统参数设置（有密码权限）、PCR定量实验设置、样本信息输入、运行管理、导出EXCEL、导入LIS（需定制接口）

分析功能

标准曲线、定量分析

输出报告

自定义报告模板、结果判断及荧光分析曲线、报告打印、预置动物/人类报告模板

正常工作条件

环境温度10-30℃、相对湿度：20-85%RH、海拔不高于2000m

外形尺寸

（L×W×H）297×210×140mm

净重

5.6Kg

附录A(规范性附录)试剂的配制

附录C（规范性附录）非洲猪瘟病毒核酸阳性及阴性对照

C.1阳性对照阳性对照制备方法：人工合成非洲猪瘟病毒VP72基因片段，序列参见附录B，将VP72基因连接于pMD20-T载体制成阳性质粒pMD20-T-VP72，使用非洲猪瘟病毒阴性猪的组织研磨液将质粒稀释至浓度为10000copies/L，保存于-20℃备用。C.2阴性对照阴性对照为非洲猪瘟病毒阴性猪的组织研磨液。附录D（规范性附录）实时荧光PCR反应液配方

实时荧光PCR反应液配方见表D.1。

表D.1实时荧光PCR反应液配方

组分

1个检测体系的加入量

2×PCR缓冲液a

12.5μL

dNTP（2.5mmol/L）

1.0μL

上游引物（10μmol/L）

下游引物（10μmol/L）

探针（10μmol/L）

Taq酶b（5U/μL）

0.5μL

去离子水

3μL

总体积

20μL

2×PCR缓冲液a:参见附录A.1配方。

Taq酶b：具有5’→3’外切活性。

附录E（资料性附录）非洲猪瘟病毒实时荧光PCR扩增实例参考