肝脏缺血再灌注(HepaticIschemiaReperfusionInjury,HIRI)模型金泰美迪

提供屏障/隔离环境大小鼠寄养、保种和实验服务,提供禽、兔、豚鼠和猪狗猴

等大动物寄养和实验服务;可开展病理、毒理、药效、安评等技术服务。

在传统的肝脏肿瘤切除、肝内胆管结石、肝破裂手术中,为防止大量出血及影响术中视野,需要暂时性选择性阻断入肝血流,一定条件下恢复肝组织血氧供应后,肝组织功能代谢障碍及结构破坏进一步加剧的过程,即为肝缺血再灌注损伤。

产品描述

1实验动物

SPF级BALB/c小鼠,雄性,周龄:6-8周,体重:20g-25g

2实验周期

1-3个工作日

3建模方法

⑴实验材料

眼科剪1个(直/尖头/10.5cm)、眼科镊1个(直/1mm宽/10cm)、眼科镊1个(弯/1mm宽/10cm)、有齿镊1个(1.88mm宽/12cm)、持针钳1个(1.55mm宽/12cm)、动脉夹1个(4cm)、撑开器1个(15mm/4cm)、7-0可吸收缝合线(金环)、酒精棉球、无菌棉签、无菌纱布、剃毛器、小鼠手术操作台

⑵小鼠麻醉方法及术前准备

2%三溴乙醇(赛默飞),25ml/kg腹腔注射麻醉小鼠剃毛备皮碘伏消毒酒精脱碘,小鼠术前12h禁食,自由饮水。

(3)实验方法

①腹腔皮肤横向切口1cm,腹膜横向切口1cm,小心剥离打开腹腔。

②小心分离出肝脏左、中叶找到门静脉和肝动脉,微动脉夹夹闭门静脉和肝动脉,使约70%的肝脏缺血,肉眼可见阻断叶颜色变浅,说明阻断成功,用止血钳夹闭皮肤切口临时关闭腹腔,同时将小鼠放在37℃恒温加热垫上保温。

③肝左中叶颜色由红色逐渐转为苍白或土灰色,而肝右肝叶颜色无明显变化,说明肝血流阻断成功。

④完成持续缺血60min后,重新打开腹腔,迅速取出血管夹,恢复缺血肝血流,0.5min左右可见缺血区肝脏由浅色逐渐恢复为鲜红色表明再灌注成功,逐层缝合腹腔肌肉和皮肤关闭腹腔,完成手术。

4注意事项

⑴分离肝蒂时要非常小心,腹膜钝性分离;

⑵术前禁食12h;

⑶夹闭时要一次完成;

⑷缺血期应注意保持腹腔充分水化,用湿纱布覆盖暴露部位。

5模型评价

(1)肝脏缺血损伤评分:

0分:无肝细胞损伤;

1分:轻度损伤,特点为细胞质空泡化,病灶核固缩;

2分:中度损伤,血窦膨胀,细胞溶质空泡化,细胞边界模糊;

3分:中度到重度损伤,凝固性坏死,大量血窦膨胀,红细胞渗出到肝锁,嗜伊红细胞增多,中性白细胞着边(附着于血管壁);

4分:严重坏死,失去肝脏结构,肝索崩解,出血,嗜中性粒细胞渗入。

(2)细胞因子的检测

肝脏损伤后,血清中TNFα、IFNγ、IL-2、IL-6、ICAM1等细胞因子的表达显著升高,可以用ELISA法检测。

(3)肝脏组织形态学检测

统一取肝左叶组织1.5cm×1cm×0.2cm于4%多聚甲醛溶液中固定24H后脱水包埋,石蜡切片后进行HE染色。

HE染色:

1-3d凝固性坏死,大量血窦膨胀,红细胞渗出到肝锁,嗜伊红细胞增多,严重坏死,失去肝脏结构,肝索崩解,出血,嗜中性粒细胞渗入;

7-14d细胞质空泡化,病灶核固缩,窦扭曲不规则,肝细胞不同程度水肿及气球样变,可波及整个肝小叶;

21-28d逐渐趋向自愈,肝索排列轻度紊乱。

(4)血清学检测

鼠HIRI缺血60min再灌注1-28DALT、SOD、TNF-a、MDA血清指标含量变化。

6模型应用

HIRI模型适用于肝损伤的研究。

7补充说明

本实验是以BALB/c小鼠为基础制备的模型,若需要其他动物模型需要跟我司联系确定详细报价。

THE END
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